Actividad contra Leishmania sp. (Kinetoplastida: Trypanosomatidae)

de plantas en una Reserva Biológica de Costa Rica

Misael Chinchilla-Carmona1, Idalia Valerio-Campos1, Ronald Sánchez-Porras2, Vanessa Bagnarello-Madrigal1, Laura Martínez-Esquivel1, Antonieta González-Paniagua2, Javier Alpizar-Cordero1, Maribel Cordero-Villalobos1 & Daniela Rodríguez-Chaves1

1. Universidad de Ciencias Médicas (UCIMED), San José, Costa Rica; chinchillacm@ucimed.com, valerioci@ucimed.com, bagnarellomv@ucimed.com, martinezel@ucimed.com, alpizarcj@ucimed.com, corderomv@ucimed.com, danirodrigu@gmail.com

2. Universidad de Costa Rica, Sede Occidente, Sección de Biología, San José, Costa Rica; rsanchez@cariari.ucr.ac.cr, agpaniagua@gmail.com

 

Recibido 22-xi-2013. Corregido 10-II-2014. Aceptado 13-iii-2014.

 

Abstract: Anti-leishmanial activity in plants from a Biological Reserve of Costa Rica. Leishmaniosis is an important human disease very difficult to treat. For this reason, many researchers in the world have been looking for anti-leishmanial chemical components present in several plant species. In Costa Rica, since no studies have been done in this field, this work aimed at the search of active chemical components in local plants that may have an activity against Leishmania sp. A total of 67 plants were selected from the Alberto Manuel Brenes Biological Reserve (REBAMB). For these collected plants, fresh or dried hidroalcoholic extracts of root, stem, mature or young leaves, flowers, and immature or mature fruits, were prepared under conventional methods. All extracts were tested for their effect against a strain of Leishmania (OCR with known characteristics). Firstly, by presumptive tests, we selected only those with some activity, and then, more specific studies were done to determine the IC50 in µg/mL; a promising plant was considered only if at least one of its parts presented an IC50<100µg/mL. Under this parameter, the following active plants were obtained and their lowest and highest IC50 obtained values presented (µg/mL): Bocconia frutescens (0.6 and 66.7), Clematis dioica (27.5 and 44.4), Cordia megalantha (80.0), Eugenia austin-smithi (90.6), Guarea bullata (98.8), Guateria tonduzii (44.4 and 66.3), Mikania holwayana (45.0 and 95.6), Nectandra membranacea (44.5 and 58.6), Neurolaena lobata (25.0 and 100.0), Persea povedae (76.9), Piper auritum (60.0), Rollinia pittieri (43.1), Solanum arboreum (25.8 and 72.5), Tetrorchidium euryphyllum (53.8 and 95.0), Witheringia solanacea (15.9 and 98.1) and Zanthoxylum juniperinum (23.4 and 97.5). Although the parasitic effect of fresh or dried extracts were almost similar, the fresh material slightly showed better results. That anti-parasitic effect occurred in one or more than four parts of the plant. Most of the active extracts did not produce lysis and aglutination which indicates a low toxicity. Since the species studied are different from those analyzed by other authors, we discuss the importance of these new findings, in relation to the new scientific knowledge, and the possible use of these plants as a leishmaniosis treatment. Rev. Biol. Trop. 62 (3): 1229-1240. Epub 2014 September 01.

 

Key words: leishmaniosis, Leishmania, medicinal plants, in vitro, Costa Rica.

La leishmaniosis es una entidad parasitaria compleja por el número de especies involucradas que dependen de la ubicación geográfica de las mismas, la localización corpórea en el ser humano, la patología causada, todo ello afectado por aspectos muy diversos de tipo epidemiológico e inmunológico, ampliamente estudiados pero aún no totalmente resueltos (Dawit, Girma, & Simenew, 2012; Strazzulla et al., 2013). Esta misma diversidad se refleja también en las dificultades que se presentan en su tratamiento, tanto en relación con el tipo de fármacos usados como en la dosificación de los mismos (Lindoso, Costa, Queiroz, & Goto, 2012). Su importancia médica es ampliamente conocida en las zonas tropicales del mundo, especialmente en su manifestación visceral, que ha causado y sigue ocasionando un número importante de muertes, especialmente cuando está asociada al virus del SIDA (Alexandrino-de-Oliveira et al., 2010). Los tipos de leishmaniosis cutáneos usualmente no causan la muerte, pero sus manifestaciones ulcerosas, no solo son estéticamente inconvenientes, sino dolorosas y proclives a infecciones secundarias bacterianas. En Costa Rica, este tipo es el más frecuente y el que ha sido más estudiado especialmente desde un punto de vista epidemiológico y de casuística humana. La revisión realizada por Jaramillo-Antillón, Espinoza-Aguirre, y Lobo-Philip (2009) es prolífica en información sobre lo conocido en este país sobre esta parasitosis. En cuanto a la leishmaniosis visceral, existe el reporte perfectamente documentado de un primer caso en Liberia, Guanacaste (Carrillo, Chinchilla, Valverde, Porras, & Mora, 1999), además de otro caso en la misma zona, cuyo diagnóstico parasitológico se hizo en su oportunidad pero no ha sido publicado. Estos hallazgos son de gran importancia y establecen una alerta, ya que como se indicó anteriormente, este tipo de leishmaniosis si puede causar la muerte.

De acuerdo con lo anterior y del hecho que la Organización Mundial de la Salud (OMS) considera a esta enfermedad dentro de las prioritarias en el contexto mundial (WHO, 2010), los estudios sobre el tratamiento de la misma siguen siendo motivo de discusión. La razón de estos análisis emergen del hecho de que las principales drogas usadas son antimoniales de conocido efecto negativo en la función hepática, y en muchos casos las dosis necesarias para la cura completa son muy altas (Lindoso et al., 2012). Surgen entonces en el mundo diversos estudios buscando componentes activos naturales que resulten, eventualmente, con una actividad antiparasitaria similar, pero menos tóxicos (Rocha, Almeida, Macedo, & Barboza-Filho, 2005; Castillo, González-Resende, Dea, & Galiana, 2011; Brito, dos Santos, Rodríguez, Brito, & Xavier-Filho, 2013). Se conocen trabajos en diversos países del Viejo Continente (Githinji et al., 2010; Mwangi et al., 2010; Bero, Hannaert, Chataigné, Hérent, & Quetin-Leclercq, 2011; Fattahi, Reza, Hossein, Barzegar, & Ghafourzadeh, 2011; Kakar et al., 2013), América del Sur (Luize et al., 2005; Peixoto et al., 2011; De Lima et al., 2012; Cechinel et al., 2013) así como en Centroamérica y el Caribe (Fernández-Calienes et al., 2008; García, Monzote, Scull, & Herrera, 2012). En Costa Rica, aunque existen algunos estudios de componentes antiparasitarios en plantas (Castro, Barrios, Chinchilla, & Guerrero, 1996; Chinchilla, Guerrero, Abarca, Barrios, & Castro, 1998; Chinchilla, Guerrero, Tamayo, & Sittenfeld, 2001; Calderón et al., 2010; Chinchilla et al., 2011, 2012), muy pocos de ellos se han realizado en relación con la leishmaniosis. Dada la riqueza de la biodiversidad costarricense y al encontrar en la literatura que contamos con especies de plantas de géneros en las que se han detectado componentes anti-Leishmania, se decidió seleccionar algunas de esas especies presentes en la Reserva Biológica Alberto Manuel Brenes (REBAMB), y realizar en ellas, los correspondientes análisis que dan origen al presente estudio.

MATERIALES Y MÉTODOS

Plantas: Diferentes partes de 67 especies de plantas seleccionadas previamente (Cuadro 1), de acuerdo con la posible actividad antiparasitaria contra Leishmania sp., fueron obtenidas de la Reserva Biológica Alberto Manuel Brenes (REBAMB). Las características ambientales en donde se ubica esta Reserva han sido ampliamente descritas en trabajos previos, pero en términos generales se trata de una zona ubicada entre los 600 y 1 640m de altura, con una temperatura promedio de 21°C y una humedad relativa del 98%, todo lo cual incide en la presencia de variados climas y nichos ecológicos (Sánchez, 2000). La recolecta del material se realizó apoyándonos en las publicaciones de Barrantes (2004) y Gomez-Laurito y Ortiz (2004) y de acuerdo con metodología previamente descrita (Chinchilla et al., 2011, 2012). En síntesis, corteza, flores, hojas maduras y tiernas, así como frutos maduros e inmaduros y raíz, fueron recolectadas en bolsas plásticas que se depositaron en un recipiente con hielo para su transporte al Laboratorio de Investigación de la Universidad de Ciencias Médicas (UCIMED) en donde fue procesado todo el material.

 

Preparación de los extractos: Todas las partes de las plantas fueron lavadas cuidadosamente y trituradas finamente. Una porción fue usada inmediatamente constituyendo el material fresco de estudio, y otra porción fue sometida a secado y convertida en polvo fino; este material se calificó como seco para todos los efectos del estudio. Para realizar un análisis presuntivo general, se usaron 15g de material fresco o seco el cual fue colocado en frascos ámbar de 250mL para la correspondiente extracción con 100mL de etanol al 70% por una semana, a temperatura ambiente con agitación ocasional. Estos extractos hidroalcohólicos fueron filtrados al vacío usando un embudo Büchner con papel Whatmann1 y luego concentrados a 40°C con un rotavapor (Buchi R-114); con este procedimiento se eliminó totalmente el alcohol.

 

Parásitos: Promastigotos de la cepa OCR (gentilmente cedida por el Dr. Rodrigo Zeledón) fueron cultivados en medio de Rugai para el mantenimiento de la cepa y específicamente para los experimentos, en medio RPMI suplementado con suero fetal bovino al 10%, ambos medios ampliamente conocidos.

 

Ensayos in vitro: Para hacer una selección previa de las plantas promisorias en cuanto a la actividad contra Leishmania, extractos crudos frescos o secos de las diferentes partes de cada planta fueron diluidos 1:20 en solución salina buferizada (PBS) con adición de dmso al 10% cuando fue necesario, y mezclados con aproximadamente 5x105 a 106 promastigotos. Estas muestras más los respectivos controles negativo (sin extracto) y positivo (incluyendo parásitos muertos por calor), fueron colocados a 4ºC por 24 horas (Vieira et al., 2001), después de lo cual la viabilidad de los parásitos fue determinada por medio del azul tripano, técnica ampliamente conocida. La actividad antiparasitaria fue determinada estableciendo como parámetro la presencia de más del 50% de promastigotos teñidos.

Aquellos extractos positivos en esta primera prueba fueron sometidos a una segunda de confirmación de potencia del efecto. Para ello se prepararon diluciones dobles de 1:20 a 1:160 de cada extracto promisorio, se agregaron los promastigotos y se procedió con el método antes indicado. Aquellos extractos cuya viabilidad fue menor del 50% en diluciones de 1:80 en adelante, fueron considerados como positivos para el correspondiente seguimiento. Este consistió en las pruebas para determinar la concentración mínima (µg/mL) del producto activo, capaz de producir la disminución de movimiento o muerte del 50% de los organismos (CI50). Para obtener este índice se realizaron diluciones seriadas del extracto de acuerdo con el peso seco previamente establecido en cada caso, procediendo luego al proceso de refrigeración por 24h y la lectura de la viabilidad de los parásitos.

 

Pruebas de toxicidad: Para este análisis se determinaron los efectos lítico y aglutinante de los extractos seleccionados según las pruebas anteriores y de acuerdo con el procedimiento descrito por Luize et al., (2005) con ligeras modificaciones. Brevemente, a 50µL del extracto en diluciones de 1:20 a 1:640 se les agregó 50µL de sangre de ratón heparinizada (heparina sódica para inyección FB 5 000 U.I./µL. Rotex Medica, lote 30085) en una concentración del 3%. Después de permanecer 24h a 4°C, las placas con las mezclas indicadas fueron leídas cualitativamente observando el efecto de lisis o aglutinación globular; se consideraron tóxicos aquellos extractos que presentaron esos efectos en diluciones arriba de 1:80.

El método de Probit (Díaz, Bulus, & Pica, 2004) fue usado especialmente para el cálculo de CI50 de la actividad antiparasitaria encontrada.

RESULTADOS

De las 67 plantas estudiadas, 47 presentaron una actividad promisoria en los análisis presuntivos iniciales (Cuadro 1). Al realizar una selección de las plantas realmente positivas por su actividad en la dilución de al menos 1:80 en algunas de sus partes, la actividad se mantuvo en casi todas ellas con la única excepción de Rollinia pittieri, planta que en conjunto con las consideradas negativas previamente, fueron descartadas para la realización de análisis posteriores. El cuadro 2 indica las partes de las plantas que presentaron una actividad contra Leishmania sp. en diluciones de 1:80 y 1:160. Como se puede observar, diferentes partes de esas plantas resultaron activas, tanto para los extractos frescos como para aquellos sometidos a desecación. Estos datos nos garantizaban una actividad medible, la cual se presenta en el cuadro 3, en donde se muestran los valores de CI50 para un total de 16 plantas que fueron las que evidenciaron valores menores a 100µg/mL, concentración límite de actividad aceptada como importante por varios autores (Kakar et al., 2013). Se destaca la B. frutescens como la planta con valores de CI50 más bajos, lo que denota una importante actividad. Otras plantas como C. dioica, M. holwayana, N. lobata, S. arboreum, W. solanaceae y Z. juniperinum mostraron en algunas de sus partes una actividad notoria.

En el cuadro 4 se hace un análisis del tipo de extracto (fresco, seco o ambos) que mostraron resultados positivos para cada una de las partes de las plantas promisorias. Aunque el número de extractos frescos activos fue ligeramente mayor, realmente no hubo diferencias con los extractos que fueron positivos después de la desecación o en ambas condiciones, frescos y secos. En la figura 1 se establece el número y el correspondiente porcentaje de plantas con 1, 2, 3, 4 y más de 4 partes positivas. Por la importancia que tiene el efecto tóxico que pueden presentar las plantas con acción antiparasitaria, en el cuadro 5 se muestra el grado de actividad lítica y aglutinante de cada uno de los extractos positivos. Cabe destacar que de acuerdo con nuestro modelo in vitro del efecto sobre eritrocitos, la gran mayoría de los extractos presentaron muy baja toxicidad.

DISCUSIÓN

Los fármacos usados hasta ahora contra la leishmaniosis son sumamente tóxicos (Lindoso et al., 2012) por lo que existe coincidencia en que es necesario el hallazgo de nuevos productos efectivos contra esta parasitosis, que sean más tolerables. En Costa Rica actualmente las investigaciones con plantas como antiparasitarios, se circunscriben a unos pocos estudios en relación con la toxoplasmosis (Chinchilla, Marín, & Catarinella, 1990) y con la malaria (Castro et al., 1996; Chinchilla et al., 2011, 2012). Conociendo que en nuestro país existe la leishmaniosis cutánea desde hace mucho tiempo (Jaramillo-Antillón et al., 2009), y más recientemente la visceral (Carrillo et al., 1999), se hacía necesario indagar si tenemos plantas con componentes químicos con actividad contra Leishmania sp. Como se puede observar por la secuencia de datos obtenidos, las 67 plantas estudiadas fueron sometidas a estudios piloto que sirvieron de filtro para así descartar plantas sin ninguna o escasa actividad contra el parásito en estudio; después de este proceso, se seleccionaron 16 especies con CI50 menor a 100µg/mL, límite escogido de acuerdo con los reportes de otros autores (Kakar et al., 2013) que lo estimaron adecuado, y considerando que para obtener una cantidad mayor a esa para obtener algún efecto, se necesitaría una cantidad inapropiada y poco práctica de materia prima. El hecho de que existe una ligera diferencia a favor del número de extractos activos frescos, en relación con los desecados, nos indica la importancia del estudio del material recién recolectado; esto se puede considerar congruente con el hecho de que muchos de los tratamientos populares con plantas se hace con material fresco (Idowu, Soniral, Ajana, & Aworinde, 2010). Llama la atención de que no todas las partes de las plantas mostraron la actividad antiparasitaria; en efecto el máximo de partes positivas por plantas fue de cuatro, sin que se observaran diferencias notorias entre la positivad de cada parte.

Aunque algunos de los géneros encontrados positivos en este estudio son similares a los encontrados en otros países, como se indica a continuación, nuestras especies con componentes activos contra Leishmania sp. no han sido reportados aún. Varias partes de B. frutescens, por ejemplo, presentaron una actividad importante contra este parásito lo cual se ha observado para otras especies como B. intergrifolia y B. pearcei (Fournet, Barrios, & Muñoz, 1994), pero para nuestra especie, los datos que se conocen son ambiguos y limitados a reportes muy superficiales. El más puntual es un poster presentado en una actividad de investigación estudiantil en que se menciona que extractos crudos de semilla de B. frutescens presentaron actividad contra L. tarentolae con un CI50 de 2.61µg/mL (Jansen, 2011). Dentro del género Clematis se informa en un reporte tecnológico de Costa Rica el hallazgo de actividad anti-leishmania en C. acapulsensis (Moreira-González & Arnáez-Serrano, 2004), pero no se suministra información sobre C. dioica cuya raíz en nuestro caso, resultó bastante activa. M. holwayana, en que varias de su partes presentaron algún grado de actividad, se relaciona con M. micrantha estudiada en Argentina por Laurella et al., (2012) y M. glomerata (Luize et al., 2005), reportadas también como portadoras de componentes anti-leishmaniásicos importantes. N. lobata fue reportada por Berger, Passreiter, Cáceres, & Kubelka (2001) con actividad considerable contra este parásito, lo cual concuerda con nuestros resultados. No encontramos reportes para S. arboreum y W. solanacea. Sin embargo, en este estudio se determinó que la raíz en la primera y la corteza en la segunda, mostraron una actividad llamativa; estos hallazgos pueden considerarse entonces como los primeros para estas plantas.

La poca actividad lítica de eritrocitos, prueba usada para demostrar toxicidad, de la mayoría de los extractos promisorios, es un aspecto positivo en cuanto al eventual uso que se le vaya a dar a los componentes que se identifiquen en las plantas seleccionadas. El hecho de que éstas se encuentran ubicadas en una zona protegida como la Reserva Biológica, garantiza la permanencia y disponibilidad de las mismas por muchos años, lo cual comienza a ser motivo de preocupación en otros países en que plantas con actividad antiparasitaria están en riesgo de extinción (Dharani et al., 2010).

Este tipo de estudios contribuyen al incremento del acervo cultural y científico de Costa Rica; además, abren las puertas al conocimiento de componentes químicos que extraídos de la rica biodiversidad costarricense, podrían eventualmente, proporcionar un aporte positivo a la salud humana por medio del tratamiento de enfermedades que como la leishmaniosis, están presentes en todas las zonas tropicales del mundo. Este estudio también incorporó el conocimiento de nuevas especies de plantas con actividad contra Leishmania, con relevancia internacional. La identificación específica de los componentes químicos que se relacionan con la actividad observada, son motivo de varios estudios que se llevan a cabo en nuestros laboratorios.

AGRADECIMIENTOS

Este estudio fue patrocinado en parte por el Ministerio de Ciencia y Tecnología (MICIT), el Consejo Nacional para Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICIT) por medio de los proyectos FI-291-09 y FI-490-2011, el Departamento de Investigación de la Universidad de Ciencias Médicas (UCIMED) y el Centro Regional de Occidente, Universidad de Costa Rica. Agradecimiento especial para Víctor Mora por su ayuda en la identificación de las plantas, a Juan Carlos Vanegas por su colaboración en los análisis estadísticos, a Laura Valerio encargada de la logística del proyecto y a los señores José Bolaños, Luis León y Hugo Pérez, por su labor asistencial y manejo de los roedores que se usan en los experimentos. Los autores agradecen al Dr. Rodrigo Zeledón por el suministro de la cepa OCR de Leishmania sp. También a un grupo de estudiantes de la UCIMED que colaboraron en el proyecto.

RESUMEN

La leishmaniosis es una enfermedad muy importante para el ser humano pero su tratamiento es bastante difícil. Por esta razón muchos investigadores han venido buscando plantas que contengan componentes químicos activos contra esta parasitosis. En Costa Rica no se tienen estudios al respecto y por eso el objetivo de este estudio fue la búsqueda de componentes activos contra Leishmania sp. en plantas de Costa Rica; 67 especies de la Reserva Biológica Alberto Manuel Brenes (REBAMB) fueron seleccionadas para realizar este trabajo. Para ello se prepararon extractos crudos hidro-alcohólicos de material fresco o desecado de raíz, tallo, hojas maduras o tiernas, flores y frutos inmaduros o maduros. Usando pruebas presuntivas y luego específicas, se analizó el efecto de tales extractos sobre una cepa de Leishmania (OCR). Se consideraron plantas promisorias solamente aquellas en que al menos una de sus partes presentara un CI50<100µg/mL. Las plantas seleccionadas fueron: Bocconia frutescens, Clematis dioica, Cordia megalantha, Eugenia austin-smithii, Guarea bullata, Guateria tonduzii, Mikania holwayana, Nectandra membranacea, Neurolaena lobata, Persea povedae, Piper auritum, Rollinia pittieri, Solanum arboreum, Tetrorchidium euryphyllum, Witheringia solanacea y Zanthoxylum juniperinum. Existió una ligera tendencia de positividad mayor para los extractos frescos y la actividad se presentó en una y hasta más de cuatro partes de la planta. La mayoría de los extractos activos no fueron tóxicos. Se discute la importancia de estos nuevos hallazgos, en relación con el nuevo conocimiento científico y su proyección en el tratamiento de la leishmaniosis.

 

Palabras clave: in vitro, Leishmania, leishmaniosis, plantas medicinales, Costa Rica.

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CUADRO 1

Plantas de la REBAMB estudiadas por su actividad contra Leishmania sp.

 

TABLE 1

Plants from REBAMB studied for the anti-leishmanial activity

 

CUADRO 1 (Continuación) / TABLE 1 (Continued)

Familia

Especie

Actividad

Partes activas

Familia

Especie

Actividad

Partes activas

Acantacee

Aphelandra aurantiaca

Negativa

Ninguna

Acantaceae

Aphelandra tridentata

Negativa

Ninguna

Lauraceae

Beilschmieda pendula

Negativa

Ninguna

Papaveraceae

Bocconia frutescens

Promisoria

C-F-FI-FM-HM-HT-R

Cecropiaceae

Cecropia obtusifolia

Promisoria

F

Cecropiaceae

Cecropia peltata

Promisoria

HT

Meliaceae

Cedrela odorata

Negativa

Ninguna

Lauraceae

Cinnamomum chavarrianum

Promisoria

FI-HM-HT

Ranunculaceae

Clematis dioica

Promisoria

C-F-FI-FM-HM-HT-R

Boraginaceae

Cordia cymosa

Promisoria

HT

Boraginaceae

Cordia megalantha

Promisoria

C-HM-R

Euphorbiaceae

Croton megistocarpus

Promisoria

HM-HT

Euphorbiaceae

Croton schiedeanus

Negativa

Ninguna

Sapindaceae

Cupania macrophylla

Negativa

Ninguna

Myrtaceae

Eugenia austin-smithii

Promisoria

C

Myrtaceae

Eugenia sp.

Promisoria

C-HM-HT

Arecaceae

Euterpe precatoria

Negativa

Ninguna

Meliaceae

Guarea bullata

Promisoria

FM-HM

Meliaceae

Guarea glabra

Promisoria

FI

Meliaceae

Guarea kunthiana

Promisoria

HM

Meliaceae

Guarea rhopalocarpa

Promisoria

FM

Annonaceae

Guatteria tonduzii

Promisoria

C-FI-HM-R

Malvaceae

Hampea appendiculata

Negativa

Ninguna

Tiliaceae

Heliocarpus appendiculatus

Promisoria

C

Hernandiaceae

Hernandia stenura

Negativa

Ninguna

Campanulaceae

Hippobroma longiflora

Promisoria

FI

Apiaceae

Hydrocotyle mexicana

Promisoria

C-R

Arecaceae

Iriartea deltoidea

Promisoria

F-HM-HT

Caricaseae

Jacaratia spinosa

Negativa

Ninguna

Asteraceae

Liabum bourgeaui

Promisoria

F-HT

Fabaceae

Lonchocarpus pentaphyllus

Promisoria

F-FI-FM

Fabaceae

Macaerium sp.

Negativa

Ninguna

Asteraceae

Mikania holwayana

Promisoria

C-F-FI-FM-HM-HT-R

Urticaceae

Myriocarpa longipes

Promisoria

HT-R

Lauraceae

Nectandra membranacea

Promisoria

C-F-FI-FM-HM-HT-R

Asteraceae

Neurolaena lobata

Promisoria

C-F-FI-FM-HM-HT-R

Lauraceae

Ocotea dentata

Negativa

Ninguna

Lauraceae

Persea povedae

Promisoria

FM

Piperaceae

Piper auritum

Promisoria

F-FI-FM-HM-HT

Piperaceae

Piper friedrichsthalii

Negativa

Ninguna

Sapotaceae

Pouteria congestifolia

Promisoria

F

Lauraceae

Povedadaphne quadriporata

Negativa

Ninguna

Rosaceae

Prunus annularis

Negativa

Ninguna

Mirtaceae

Psidium guajava

Promisoria

C-HM

Rubiaceae

Psychotria elata

Promisoria

F-FM-HM-HT

Fabaceae

Pterocarpus hayesii

Promisoria

HT

Fagaceae

Quercus cortesii

Promisoria

HT-R

Fagaceae

Quercus insignis

Promisoria

FI

Annonaceae

Rollinia pittier

Promisoria

Fl

Meliaceae

Ruagea glabra

Promisoria

FI-FM

Anathaceae

Ruellia tubiflora

Promisoria

HM

Caprifoliaceae

Sambucus canadensis

Promisoria

C

Caesalpinaceae

Senna papillosa

Promisoria

FI

Siparunaceae

Siparuna thecaphora

Promisoria

FI

Solanaceae

Solanum arboreum

Promisoria

F-FI-FM-R

Solanaceae

Solanum quitoense

Negativa

Ninguna

Bignoniaceae

Tabebuia chrysantha

Promisoria

C

Apocynaceae

Tabernaemontana longipes

Negativa

Ninguna

Anacardiaceae

Tapiriria mexicana

Negativa

Ninguna

Euphorbiaceae

Tetrorchidium euryphyllum

Promisoria

C-F-FM-HT

Ticodendraceae

Ticodendron incognitum

Negativa

Ninguna

Urticaceae

Urera baccifera

Negativa

Ninguna

Asteraceae

Vernonia patens

Promisoria

F-HT

Clusiaceae

Vismia baccifera

Promisoria

C-FI-HT

Solanaceae

Witheringia solanacea

Promisoria

C-F-FI-FM-HM-HT-R

Araceae

Xanthosoma undipes

Promisoria

FI

Rutaceae

Zanthoxylum juniperinum

Promisoria

R

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz.

CUADRO 2

Actividad de varias partes de plantas de la REBAMB sobre promastigotos de Leishmania sp.

 

TABLE 2

Anti-Leishmania activity of several parts of plants from REBAMB

 

Familia

Género

Actividad antiparasitaria (Dilución positiva 1/80, 1/160)

C

FL

FI

FM

HM

HT

R

F

S

F

S

F

S

F

S

F

S

F

S

F

S

Papaveraceae

B. frutescens

160

160

160

160

160

160

160

160

 

160

160

160

160

160

Cecropiaceae

C. peltata

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

160

 

 

Lauraceae

C. chavarrianum

 

 

 

 

 

160

 

 

 

80

 

80

 

 

Ranunculaceae

C. dioica

160

 

80

80

80

80

80

80

80

160

80

 

160

 

Boraginaceae

C. cymosa

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

 

 

Boraginaceae

C. megalantha

 

160

 

 

 

 

 

 

 

160

 

 

 

160

Euphorbiaceae

C. megistocarpus

 

160

 

 

 

 

 

 

160

 

160

 

 

 

Myrtaceae

E. austin-smithii

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Myrtaceae

Eugenia sp.

160

 

 

 

 

 

160

 

 

160

160

160

 

 

Meliaceae

G. bullata

 

 

 

 

 

 

160

 

 

160

 

 

 

 

Meliaceae

G. glabra

 

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

Meliaceae

G. kunthiana

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

Meliaceae

G. rhopalocarpa

 

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

Annonaceae

G. tonduzii

160

 

80

160

 

80

80

 

 

80

 

 

 

160

Tiliaceae

H. appendiculatus

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Campanulaceae

H. longiflora

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

Apiaceae

H. mexicana

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

Arecaceae

I. deltoidea

 

 

80

160

 

 

 

 

 

160

80

 

 

 

Asteraceae

L. bourgeaui

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

160

160

 

 

Fabaceae

L. pentaphyllus

 

 

 

160

80

 

160

80

 

 

 

 

 

 

Asteraceae

M. holwayana

160

160

160

160

 

 

 

 

160

160

160

160

160

160

Urticaceae

M. longipes

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

80

 

Lauraceae

N. membranaceae

 

160

 

160

 

160

 

160

160

160

160

160

80

 

Asteraceae

N. lobata

 

80

160

160

160

160

160

160

160

160

160

160

80

160

Lauraceae

P. povedae

 

 

 

 

 

160

160

 

 

 

 

 

 

 

Piperaceae

P. auritum

 

 

 

160

 

 

 

160

 

160

 

160

 

 

Piperaceae

P. friedrichsthalii

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

Mirtaceae

P. guajava

160

 

 

 

 

 

 

80

160

 

 

 

 

 

Fabaceae

P. hayesii

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

 

 

 

Rubiaceae

P. elata

 

80

 

 

 

160

 

 

 

80

 

 

 

 

Fagaceae

Q. cortesi

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

 

160

 

Fagaceae

Q. insignis

 

 

 

 

 

80

 

 

 

 

 

 

 

 

Caprifoliaceae

S. canadensis

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Anonaceae

Rollinia pittier

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Meliaceae

R. glabra

 

 

 

 

 

160

 

80

 

 

 

 

 

 

Acanthaceae

R. tubiflora

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

Caesalpinaceae

S. papillosa

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

Siparunaceae

S. thecaphora

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

Solanaceae

S. arboreum

 

 

 

160

160

 

160

160

 

160

 

 

 

160

Bignoniaceae

T. chrysantha

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

Euphorbiaceae

T. euryphyllum

 

160

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

Clusiaceae

V. baccifera

 

160

 

 

160

160

 

 

 

 

 

160

 

 

Solanaceae

W. solanacea

160

160

160

160

160

 

 

160

 

160

160

160

 

160

Araceae

X. undipes

 

 

 

 

 

160

 

 

 

 

 

 

 

 

Rutaceae

Z. juniperinum

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

160

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz.

CUADRO 3

Concentración mínima inhibitoria anti-Leishmania sp. (CI50, µg/mL) de los extractos frescos (F)

y secos (S) de las partes positivas de plantas de la REBAMB

 

TABLE 3

Minimal inhibitory concentration anti-Leishmania sp. (IC50, µg/mL) of the fresh (F)

and dry (S) extracts of the positive parts of plants from REBAMB

 

Especie

Parte de la planta

C

FL

FI

FM

HM

HT

R

F

S

F

S

f

s

F

S

F

S

F

S

F

S

B. frutescens

9.7

2.8

56.9

38.1

7.5

12.5

6.3

6.4

 

66.7

30.3

10.8

0.6

3.5

C. dioica

44.4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

27.5

 

C. megalantha

 

80.0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

E. austin-smithii

90.6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

G. bullata

 

 

 

 

 

 

98.8

 

 

 

 

 

 

 

G. tonduzii

 

53.8

 

 

 

66.3

 

 

 

 

 

 

 

44.4

M. holwayana

45.0

53.1

65.6

 

 

 

 

 

 

 

49.2

 

95.6

 

N. membranacea

 

 

 

 

 

 

 

 

44.5

 

58.6

 

 

 

N. lobata

81.3

100.0

 

 

52.8

 

25.0

46.4

79.4

 

 

 

 

 

P. povedae

 

 

 

 

 

 

 

76.9

 

 

 

 

 

 

P. auritum

 

 

 

 

 

 

 

 

 

60.0*

 

 

 

 

R. pittieri

 

 

 

43.1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

S. arboreum

 

 

 

53.2

 

72.5

56.3

72.5

 

 

 

 

 

25.8

T. euryphyllum

 

53.8

 

 

 

 

95

 

 

 

93.8

 

 

 

W. solanacea

15.9

 

76.9

 

98.1

 

 

 

 

 

34.1

82.5

 

96.3

Z. juniperinum

23.4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

97.5

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz, f:fresco, s:seco.

CUADRO 4

Distribución de los extractos positivos (CI50<100µg/mL) según parte de la planta y tipo de extracto

 

TABLE 4

Distribution of the positive extracts (IC50<100µg/mL) according to part of the plant and extract type

 

Tipo de extracto

Partes de la planta

C

F

FI

FM

HM

HT

R

TOTAL

No.

%

No.

%

No.

%

No.

%

No.

%

No.

%

No.

%

No.

%

Fresco solo

4

23.5

2

11.8

2

11.8

2

11.8

2

11.8

3

17.6

2

11.8

17

41.5

Seco solo

3

21.3

2

14.3

2

14.3

1

7.1

1

7.1

0

0

4

28.6

14

34.1

Fresco y seco

3

30.0

1

10.0

1

10.0

3

30.0

0

0.0

2

20.0

1

10.0

10

24.3

TOTAL

10

24.4

5

12.2

5

12.2

6

14.6

3

7.3

5

12.2

7

17.1

41

100.0

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz.

Fig. 1. Distribución de las plantas de acuerdo con el número de sus partes activas contra Leishmania sp.

Fig. 1. Distribution of the plants according to the number of active parts against Leishmania sp.

3683.png

CUADRO 5

Relación entre la toxicidad máxima in vitro (diluciones 1:80, 1:160) y la actividad contra Leishmania sp.

de las partes positivas de plantas de la REBAMB

 

TABLE 5

Relation between the maximum in vitro toxicity (dilutions 1:80, 1:160) and the anti-Leishmania sp. activity

of the positive parts from plants from REBAMB

 

Especie

Actividad Lítica o Aglutinante

Ligera

Intensa

Ausente

1:80

1:160

1:80

1:160

 

B. frutescens

F,Fs

FIs

 

 

C,F, FI,FM, HT, R, FMs, HMs, HTs, Rs

C. dioica

 

 

 

C, F, FI, FM, R, Fs, FIs, HMs

C. megalantha

Cs

 

 

 

 

E. austin-smithii

 

 

 

 

C

G. bullata

 

 

 

 

FM

G. tonduzii

Rs

 

 

FI

Cs

M. holwayana

 

HT

 

R

C, F, Cs,

N. membranacea

 

 

 

HM, HT

Fs

N. lobata

 

 

 

 

C,F,FI, HM, Cs, FMs

P. povedae

 

 

 

 

FMs

P. auritum

 

 

 

 

HMs

R. pittier

Fs

 

 

 

 

S. arboreum

 

 

 

 

FM ,HT, Fs, FIs, FMs

T. euryphyllum

 

 

 

 

FM, HT, Fs

W. solanacea

 

 

 

C, F, HT, HTs

FI, Rs

Z. juniperinum

Cs

 

 

 

Rs

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz, s: extracto seco.