La leishmaniosis es una entidad parasitaria compleja por el número de especies involucradas que dependen de la ubicación geográfica de las mismas, la localización corpórea en el ser humano, la patología causada, todo ello afectado por aspectos muy diversos de tipo epidemiológico e inmunológico, ampliamente estudiados pero aún no totalmente resueltos (Dawit, Girma, & Simenew, 2012; Strazzulla et al., 2013). Esta misma diversidad se refleja también en las dificultades que se presentan en su tratamiento, tanto en relación con el tipo de fármacos usados como en la dosificación de los mismos (Lindoso, Costa, Queiroz, & Goto, 2012). Su importancia médica es ampliamente conocida en las zonas tropicales del mundo, especialmente en su manifestación visceral, que ha causado y sigue ocasionando un número importante de muertes, especialmente cuando está asociada al virus del SIDA (Alexandrino-de-Oliveira et al., 2010). Los tipos de leishmaniosis cutáneos usualmente no causan la muerte, pero sus manifestaciones ulcerosas, no solo son estéticamente inconvenientes, sino dolorosas y proclives a infecciones secundarias bacterianas. En Costa Rica, este tipo es el más frecuente y el que ha sido más estudiado especialmente desde un punto de vista epidemiológico y de casuística humana. La revisión realizada por Jaramillo-Antillón, Espinoza-Aguirre, y Lobo-Philip (2009) es prolífica en información sobre lo conocido en este país sobre esta parasitosis. En cuanto a la leishmaniosis visceral, existe el reporte perfectamente documentado de un primer caso en Liberia, Guanacaste (Carrillo, Chinchilla, Valverde, Porras, & Mora, 1999), además de otro caso en la misma zona, cuyo diagnóstico parasitológico se hizo en su oportunidad pero no ha sido publicado. Estos hallazgos son de gran importancia y establecen una alerta, ya que como se indicó anteriormente, este tipo de leishmaniosis si puede causar la muerte.

De acuerdo con lo anterior y del hecho que la Organización Mundial de la Salud (OMS) considera a esta enfermedad dentro de las prioritarias en el contexto mundial (WHO, 2010), los estudios sobre el tratamiento de la misma siguen siendo motivo de discusión. La razón de estos análisis emergen del hecho de que las principales drogas usadas son antimoniales de conocido efecto negativo en la función hepática, y en muchos casos las dosis necesarias para la cura completa son muy altas (Lindoso et al., 2012). Surgen entonces en el mundo diversos estudios buscando componentes activos naturales que resulten, eventualmente, con una actividad antiparasitaria similar, pero menos tóxicos (Rocha, Almeida, Macedo, & Barboza-Filho, 2005; Castillo, González-Resende, Dea, & Galiana, 2011; Brito, dos Santos, Rodríguez, Brito, & Xavier-Filho, 2013). Se conocen trabajos en diversos países del Viejo Continente (Githinji et al., 2010; Mwangi et al., 2010; Bero, Hannaert, Chataigné, Hérent, & Quetin-Leclercq, 2011; Fattahi, Reza, Hossein, Barzegar, & Ghafourzadeh, 2011; Kakar et al., 2013), América del Sur (Luize et al., 2005; Peixoto et al., 2011; De Lima et al., 2012; Cechinel et al., 2013) así como en Centroamérica y el Caribe (Fernández-Calienes et al., 2008; García, Monzote, Scull, & Herrera, 2012). En Costa Rica, aunque existen algunos estudios de componentes antiparasitarios en plantas (Castro, Barrios, Chinchilla, & Guerrero, 1996; Chinchilla, Guerrero, Abarca, Barrios, & Castro, 1998; Chinchilla, Guerrero, Tamayo, & Sittenfeld, 2001; Calderón et al., 2010; Chinchilla et al., 2011, 2012), muy pocos de ellos se han realizado en relación con la leishmaniosis. Dada la riqueza de la biodiversidad costarricense y al encontrar en la literatura que contamos con especies de plantas de géneros en las que se han detectado componentes anti-Leishmania, se decidió seleccionar algunas de esas especies presentes en la Reserva Biológica Alberto Manuel Brenes (REBAMB), y realizar en ellas, los correspondientes análisis que dan origen al presente estudio.

MATERIALES Y MÉTODOS

Plantas: Diferentes partes de 67 especies de plantas seleccionadas previamente (Cuadro 1), de acuerdo con la posible actividad antiparasitaria contra Leishmania sp., fueron obtenidas de la Reserva Biológica Alberto Manuel Brenes (REBAMB). Las características ambientales en donde se ubica esta Reserva han sido ampliamente descritas en trabajos previos, pero en términos generales se trata de una zona ubicada entre los 600 y 1 640m de altura, con una temperatura promedio de 21°C y una humedad relativa del 98%, todo lo cual incide en la presencia de variados climas y nichos ecológicos (Sánchez, 2000). La recolecta del material se realizó apoyándonos en las publicaciones de Barrantes (2004) y Gomez-Laurito y Ortiz (2004) y de acuerdo con metodología previamente descrita (Chinchilla et al., 2011, 2012). En síntesis, corteza, flores, hojas maduras y tiernas, así como frutos maduros e inmaduros y raíz, fueron recolectadas en bolsas plásticas que se depositaron en un recipiente con hielo para su transporte al Laboratorio de Investigación de la Universidad de Ciencias Médicas (UCIMED) en donde fue procesado todo el material.

 

Preparación de los extractos: Todas las partes de las plantas fueron lavadas cuidadosamente y trituradas finamente. Una porción fue usada inmediatamente constituyendo el material fresco de estudio, y otra porción fue sometida a secado y convertida en polvo fino; este material se calificó como seco para todos los efectos del estudio. Para realizar un análisis presuntivo general, se usaron 15g de material fresco o seco el cual fue colocado en frascos ámbar de 250mL para la correspondiente extracción con 100mL de etanol al 70% por una semana, a temperatura ambiente con agitación ocasional. Estos extractos hidroalcohólicos fueron filtrados al vacío usando un embudo Büchner con papel Whatmann1 y luego concentrados a 40°C con un rotavapor (Buchi R-114); con este procedimiento se eliminó totalmente el alcohol.

 

Parásitos: Promastigotos de la cepa OCR (gentilmente cedida por el Dr. Rodrigo Zeledón) fueron cultivados en medio de Rugai para el mantenimiento de la cepa y específicamente para los experimentos, en medio RPMI suplementado con suero fetal bovino al 10%, ambos medios ampliamente conocidos.

 

Ensayos in vitro: Para hacer una selección previa de las plantas promisorias en cuanto a la actividad contra Leishmania, extractos crudos frescos o secos de las diferentes partes de cada planta fueron diluidos 1:20 en solución salina buferizada (PBS) con adición de dmso al 10% cuando fue necesario, y mezclados con aproximadamente 5x105 a 106 promastigotos. Estas muestras más los respectivos controles negativo (sin extracto) y positivo (incluyendo parásitos muertos por calor), fueron colocados a 4ºC por 24 horas (Vieira et al., 2001), después de lo cual la viabilidad de los parásitos fue determinada por medio del azul tripano, técnica ampliamente conocida. La actividad antiparasitaria fue determinada estableciendo como parámetro la presencia de más del 50% de promastigotos teñidos.

Aquellos extractos positivos en esta primera prueba fueron sometidos a una segunda de confirmación de potencia del efecto. Para ello se prepararon diluciones dobles de 1:20 a 1:160 de cada extracto promisorio, se agregaron los promastigotos y se procedió con el método antes indicado. Aquellos extractos cuya viabilidad fue menor del 50% en diluciones de 1:80 en adelante, fueron considerados como positivos para el correspondiente seguimiento. Este consistió en las pruebas para determinar la concentración mínima (µg/mL) del producto activo, capaz de producir la disminución de movimiento o muerte del 50% de los organismos (CI50). Para obtener este índice se realizaron diluciones seriadas del extracto de acuerdo con el peso seco previamente establecido en cada caso, procediendo luego al proceso de refrigeración por 24h y la lectura de la viabilidad de los parásitos.

 

Pruebas de toxicidad: Para este análisis se determinaron los efectos lítico y aglutinante de los extractos seleccionados según las pruebas anteriores y de acuerdo con el procedimiento descrito por Luize et al., (2005) con ligeras modificaciones. Brevemente, a 50µL del extracto en diluciones de 1:20 a 1:640 se les agregó 50µL de sangre de ratón heparinizada (heparina sódica para inyección FB 5 000 U.I./µL. Rotex Medica, lote 30085) en una concentración del 3%. Después de permanecer 24h a 4°C, las placas con las mezclas indicadas fueron leídas cualitativamente observando el efecto de lisis o aglutinación globular; se consideraron tóxicos aquellos extractos que presentaron esos efectos en diluciones arriba de 1:80.

El método de Probit (Díaz, Bulus, & Pica, 2004) fue usado especialmente para el cálculo de CI50 de la actividad antiparasitaria encontrada.

RESULTADOS

De las 67 plantas estudiadas, 47 presentaron una actividad promisoria en los análisis presuntivos iniciales (Cuadro 1). Al realizar una selección de las plantas realmente positivas por su actividad en la dilución de al menos 1:80 en algunas de sus partes, la actividad se mantuvo en casi todas ellas con la única excepción de Rollinia pittieri, planta que en conjunto con las consideradas negativas previamente, fueron descartadas para la realización de análisis posteriores. El cuadro 2 indica las partes de las plantas que presentaron una actividad contra Leishmania sp. en diluciones de 1:80 y 1:160. Como se puede observar, diferentes partes de esas plantas resultaron activas, tanto para los extractos frescos como para aquellos sometidos a desecación. Estos datos nos garantizaban una actividad medible, la cual se presenta en el cuadro 3, en donde se muestran los valores de CI50 para un total de 16 plantas que fueron las que evidenciaron valores menores a 100µg/mL, concentración límite de actividad aceptada como importante por varios autores (Kakar et al., 2013). Se destaca la B. frutescens como la planta con valores de CI50 más bajos, lo que denota una importante actividad. Otras plantas como C. dioica, M. holwayana, N. lobata, S. arboreum, W. solanaceae y Z. juniperinum mostraron en algunas de sus partes una actividad notoria.

En el cuadro 4 se hace un análisis del tipo de extracto (fresco, seco o ambos) que mostraron resultados positivos para cada una de las partes de las plantas promisorias. Aunque el número de extractos frescos activos fue ligeramente mayor, realmente no hubo diferencias con los extractos que fueron positivos después de la desecación o en ambas condiciones, frescos y secos. En la figura 1 se establece el número y el correspondiente porcentaje de plantas con 1, 2, 3, 4 y más de 4 partes positivas. Por la importancia que tiene el efecto tóxico que pueden presentar las plantas con acción antiparasitaria, en el cuadro 5 se muestra el grado de actividad lítica y aglutinante de cada uno de los extractos positivos. Cabe destacar que de acuerdo con nuestro modelo in vitro del efecto sobre eritrocitos, la gran mayoría de los extractos presentaron muy baja toxicidad.

DISCUSIÓN

Los fármacos usados hasta ahora contra la leishmaniosis son sumamente tóxicos (Lindoso et al., 2012) por lo que existe coincidencia en que es necesario el hallazgo de nuevos productos efectivos contra esta parasitosis, que sean más tolerables. En Costa Rica actualmente las investigaciones con plantas como antiparasitarios, se circunscriben a unos pocos estudios en relación con la toxoplasmosis (Chinchilla, Marín, & Catarinella, 1990) y con la malaria (Castro et al., 1996; Chinchilla et al., 2011, 2012). Conociendo que en nuestro país existe la leishmaniosis cutánea desde hace mucho tiempo (Jaramillo-Antillón et al., 2009), y más recientemente la visceral (Carrillo et al., 1999), se hacía necesario indagar si tenemos plantas con componentes químicos con actividad contra Leishmania sp. Como se puede observar por la secuencia de datos obtenidos, las 67 plantas estudiadas fueron sometidas a estudios piloto que sirvieron de filtro para así descartar plantas sin ninguna o escasa actividad contra el parásito en estudio; después de este proceso, se seleccionaron 16 especies con CI50 menor a 100µg/mL, límite escogido de acuerdo con los reportes de otros autores (Kakar et al., 2013) que lo estimaron adecuado, y considerando que para obtener una cantidad mayor a esa para obtener algún efecto, se necesitaría una cantidad inapropiada y poco práctica de materia prima. El hecho de que existe una ligera diferencia a favor del número de extractos activos frescos, en relación con los desecados, nos indica la importancia del estudio del material recién recolectado; esto se puede considerar congruente con el hecho de que muchos de los tratamientos populares con plantas se hace con material fresco (Idowu, Soniral, Ajana, & Aworinde, 2010). Llama la atención de que no todas las partes de las plantas mostraron la actividad antiparasitaria; en efecto el máximo de partes positivas por plantas fue de cuatro, sin que se observaran diferencias notorias entre la positivad de cada parte.

Aunque algunos de los géneros encontrados positivos en este estudio son similares a los encontrados en otros países, como se indica a continuación, nuestras especies con componentes activos contra Leishmania sp. no han sido reportados aún. Varias partes de B. frutescens, por ejemplo, presentaron una actividad importante contra este parásito lo cual se ha observado para otras especies como B. intergrifolia y B. pearcei (Fournet, Barrios, & Muñoz, 1994), pero para nuestra especie, los datos que se conocen son ambiguos y limitados a reportes muy superficiales. El más puntual es un poster presentado en una actividad de investigación estudiantil en que se menciona que extractos crudos de semilla de B. frutescens presentaron actividad contra L. tarentolae con un CI50 de 2.61µg/mL (Jansen, 2011). Dentro del género Clematis se informa en un reporte tecnológico de Costa Rica el hallazgo de actividad anti-leishmania en C. acapulsensis (Moreira-González & Arnáez-Serrano, 2004), pero no se suministra información sobre C. dioica cuya raíz en nuestro caso, resultó bastante activa. M. holwayana, en que varias de su partes presentaron algún grado de actividad, se relaciona con M. micrantha estudiada en Argentina por Laurella et al., (2012) y M. glomerata (Luize et al., 2005), reportadas también como portadoras de componentes anti-leishmaniásicos importantes. N. lobata fue reportada por Berger, Passreiter, Cáceres, & Kubelka (2001) con actividad considerable contra este parásito, lo cual concuerda con nuestros resultados. No encontramos reportes para S. arboreum y W. solanacea. Sin embargo, en este estudio se determinó que la raíz en la primera y la corteza en la segunda, mostraron una actividad llamativa; estos hallazgos pueden considerarse entonces como los primeros para estas plantas.

La poca actividad lítica de eritrocitos, prueba usada para demostrar toxicidad, de la mayoría de los extractos promisorios, es un aspecto positivo en cuanto al eventual uso que se le vaya a dar a los componentes que se identifiquen en las plantas seleccionadas. El hecho de que éstas se encuentran ubicadas en una zona protegida como la Reserva Biológica, garantiza la permanencia y disponibilidad de las mismas por muchos años, lo cual comienza a ser motivo de preocupación en otros países en que plantas con actividad antiparasitaria están en riesgo de extinción (Dharani et al., 2010).

Este tipo de estudios contribuyen al incremento del acervo cultural y científico de Costa Rica; además, abren las puertas al conocimiento de componentes químicos que extraídos de la rica biodiversidad costarricense, podrían eventualmente, proporcionar un aporte positivo a la salud humana por medio del tratamiento de enfermedades que como la leishmaniosis, están presentes en todas las zonas tropicales del mundo. Este estudio también incorporó el conocimiento de nuevas especies de plantas con actividad contra Leishmania, con relevancia internacional. La identificación específica de los componentes químicos que se relacionan con la actividad observada, son motivo de varios estudios que se llevan a cabo en nuestros laboratorios.

AGRADECIMIENTOS

Este estudio fue patrocinado en parte por el Ministerio de Ciencia y Tecnología (MICIT), el Consejo Nacional para Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICIT) por medio de los proyectos FI-291-09 y FI-490-2011, el Departamento de Investigación de la Universidad de Ciencias Médicas (UCIMED) y el Centro Regional de Occidente, Universidad de Costa Rica. Agradecimiento especial para Víctor Mora por su ayuda en la identificación de las plantas, a Juan Carlos Vanegas por su colaboración en los análisis estadísticos, a Laura Valerio encargada de la logística del proyecto y a los señores José Bolaños, Luis León y Hugo Pérez, por su labor asistencial y manejo de los roedores que se usan en los experimentos. Los autores agradecen al Dr. Rodrigo Zeledón por el suministro de la cepa OCR de Leishmania sp. También a un grupo de estudiantes de la UCIMED que colaboraron en el proyecto.

RESUMEN

La leishmaniosis es una enfermedad muy importante para el ser humano pero su tratamiento es bastante difícil. Por esta razón muchos investigadores han venido buscando plantas que contengan componentes químicos activos contra esta parasitosis. En Costa Rica no se tienen estudios al respecto y por eso el objetivo de este estudio fue la búsqueda de componentes activos contra Leishmania sp. en plantas de Costa Rica; 67 especies de la Reserva Biológica Alberto Manuel Brenes (REBAMB) fueron seleccionadas para realizar este trabajo. Para ello se prepararon extractos crudos hidro-alcohólicos de material fresco o desecado de raíz, tallo, hojas maduras o tiernas, flores y frutos inmaduros o maduros. Usando pruebas presuntivas y luego específicas, se analizó el efecto de tales extractos sobre una cepa de Leishmania (OCR). Se consideraron plantas promisorias solamente aquellas en que al menos una de sus partes presentara un CI50<100µg/mL. Las plantas seleccionadas fueron: Bocconia frutescens, Clematis dioica, Cordia megalantha, Eugenia austin-smithii, Guarea bullata, Guateria tonduzii, Mikania holwayana, Nectandra membranacea, Neurolaena lobata, Persea povedae, Piper auritum, Rollinia pittieri, Solanum arboreum, Tetrorchidium euryphyllum, Witheringia solanacea y Zanthoxylum juniperinum. Existió una ligera tendencia de positividad mayor para los extractos frescos y la actividad se presentó en una y hasta más de cuatro partes de la planta. La mayoría de los extractos activos no fueron tóxicos. Se discute la importancia de estos nuevos hallazgos, en relación con el nuevo conocimiento científico y su proyección en el tratamiento de la leishmaniosis.

 

Palabras clave: in vitro, Leishmania, leishmaniosis, plantas medicinales, Costa Rica.

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CUADRO 1

Plantas de la REBAMB estudiadas por su actividad contra Leishmania sp.

 

TABLE 1

Plants from REBAMB studied for the anti-leishmanial activity

 

CUADRO 1 (Continuación) / TABLE 1 (Continued)
Familia	Especie	Actividad	Partes activas
Familia	Especie	Actividad	Partes activas
Acantacee	Aphelandra aurantiaca	Negativa	Ninguna
Acantaceae	Aphelandra tridentata	Negativa	Ninguna
Lauraceae	Beilschmieda pendula	Negativa	Ninguna
Papaveraceae	Bocconia frutescens	Promisoria	C-F-FI-FM-HM-HT-R
Cecropiaceae	Cecropia obtusifolia	Promisoria	F
Cecropiaceae	Cecropia peltata	Promisoria	HT
Meliaceae	Cedrela odorata	Negativa	Ninguna
Lauraceae	Cinnamomum chavarrianum	Promisoria	FI-HM-HT
Ranunculaceae	Clematis dioica	Promisoria	C-F-FI-FM-HM-HT-R
Boraginaceae	Cordia cymosa	Promisoria	HT
Boraginaceae	Cordia megalantha	Promisoria	C-HM-R
Euphorbiaceae	Croton megistocarpus	Promisoria	HM-HT
Euphorbiaceae	Croton schiedeanus	Negativa	Ninguna
Sapindaceae	Cupania macrophylla	Negativa	Ninguna
Myrtaceae	Eugenia austin-smithii	Promisoria	C
Myrtaceae	Eugenia sp.	Promisoria	C-HM-HT
Arecaceae	Euterpe precatoria	Negativa	Ninguna
Meliaceae	Guarea bullata	Promisoria	FM-HM
Meliaceae	Guarea glabra	Promisoria	FI
Meliaceae	Guarea kunthiana	Promisoria	HM
Meliaceae	Guarea rhopalocarpa	Promisoria	FM
Annonaceae	Guatteria tonduzii	Promisoria	C-FI-HM-R
Malvaceae	Hampea appendiculata	Negativa	Ninguna
Tiliaceae	Heliocarpus appendiculatus	Promisoria	C
Hernandiaceae	Hernandia stenura	Negativa	Ninguna
Campanulaceae	Hippobroma longiflora	Promisoria	FI
Apiaceae	Hydrocotyle mexicana	Promisoria	C-R
Arecaceae	Iriartea deltoidea	Promisoria	F-HM-HT
Caricaseae	Jacaratia spinosa	Negativa	Ninguna
Asteraceae	Liabum bourgeaui	Promisoria	F-HT
Fabaceae	Lonchocarpus pentaphyllus	Promisoria	F-FI-FM
Fabaceae	Macaerium sp.	Negativa	Ninguna
Asteraceae	Mikania holwayana	Promisoria	C-F-FI-FM-HM-HT-R
Urticaceae	Myriocarpa longipes	Promisoria	HT-R
Lauraceae	Nectandra membranacea	Promisoria	C-F-FI-FM-HM-HT-R
Asteraceae	Neurolaena lobata	Promisoria	C-F-FI-FM-HM-HT-R
Lauraceae	Ocotea dentata	Negativa	Ninguna
Lauraceae	Persea povedae	Promisoria	FM
Piperaceae	Piper auritum	Promisoria	F-FI-FM-HM-HT
Piperaceae	Piper friedrichsthalii	Negativa	Ninguna
Sapotaceae	Pouteria congestifolia	Promisoria	F
Lauraceae	Povedadaphne quadriporata	Negativa	Ninguna
Rosaceae	Prunus annularis	Negativa	Ninguna
Mirtaceae	Psidium guajava	Promisoria	C-HM
Rubiaceae	Psychotria elata	Promisoria	F-FM-HM-HT
Fabaceae	Pterocarpus hayesii	Promisoria	HT
Fagaceae	Quercus cortesii	Promisoria	HT-R
Fagaceae	Quercus insignis	Promisoria	FI
Annonaceae	Rollinia pittier	Promisoria	Fl
Meliaceae	Ruagea glabra	Promisoria	FI-FM
Anathaceae	Ruellia tubiflora	Promisoria	HM
Caprifoliaceae	Sambucus canadensis	Promisoria	C
Caesalpinaceae	Senna papillosa	Promisoria	FI
Siparunaceae	Siparuna thecaphora	Promisoria	FI
Solanaceae	Solanum arboreum	Promisoria	F-FI-FM-R
Solanaceae	Solanum quitoense	Negativa	Ninguna
Bignoniaceae	Tabebuia chrysantha	Promisoria	C
Apocynaceae	Tabernaemontana longipes	Negativa	Ninguna
Anacardiaceae	Tapiriria mexicana	Negativa	Ninguna
Euphorbiaceae	Tetrorchidium euryphyllum	Promisoria	C-F-FM-HT
Ticodendraceae	Ticodendron incognitum	Negativa	Ninguna
Urticaceae	Urera baccifera	Negativa	Ninguna
Asteraceae	Vernonia patens	Promisoria	F-HT
Clusiaceae	Vismia baccifera	Promisoria	C-FI-HT
Solanaceae	Witheringia solanacea	Promisoria	C-F-FI-FM-HM-HT-R
Araceae	Xanthosoma undipes	Promisoria	FI
Rutaceae	Zanthoxylum juniperinum	Promisoria	R

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz.

CUADRO 2

Actividad de varias partes de plantas de la REBAMB sobre promastigotos de Leishmania sp.

 

TABLE 2

Anti-Leishmania activity of several parts of plants from REBAMB

 

Familia	Género	Actividad antiparasitaria (Dilución positiva 1/80, 1/160)
		C		FL		FI		FM		HM		HT		R
		F	S	F	S	F	S	F	S	F	S	F	S	F	S
Papaveraceae	B. frutescens	160	160	160	160	160	160	160	160		160	160	160	160	160
Cecropiaceae	C. peltata											160	160
Lauraceae	C. chavarrianum						160				80		80
Ranunculaceae	C. dioica	160		80	80	80	80	80	80	80	160	80		160
Boraginaceae	C. cymosa												160
Boraginaceae	C. megalantha		160								160				160
Euphorbiaceae	C. megistocarpus		160							160		160
Myrtaceae	E. austin-smithii	160
Myrtaceae	Eugenia sp.	160						160			160	160	160
Meliaceae	G. bullata							160			160
Meliaceae	G. glabra							160
Meliaceae	G. kunthiana										160
Meliaceae	G. rhopalocarpa							160
Annonaceae	G. tonduzii	160		80	160		80	80			80				160
Tiliaceae	H. appendiculatus		160
Campanulaceae	H. longiflora						160
Apiaceae	H. mexicana		160												160
Arecaceae	I. deltoidea			80	160						160	80
Asteraceae	L. bourgeaui			160								160	160
Fabaceae	L. pentaphyllus				160	80		160	80
Asteraceae	M. holwayana	160	160	160	160					160	160	160	160	160	160
Urticaceae	M. longipes												160	80
Lauraceae	N. membranaceae		160		160		160		160	160	160	160	160	80
Asteraceae	N. lobata		80	160	160	160	160	160	160	160	160	160	160	80	160
Lauraceae	P. povedae						160	160
Piperaceae	P. auritum				160				160		160		160
Piperaceae	P. friedrichsthalii														160
Mirtaceae	P. guajava	160							80	160
Fabaceae	P. hayesii											160
Rubiaceae	P. elata		80				160				80
Fagaceae	Q. cortesi	160										160		160
Fagaceae	Q. insignis						80
Caprifoliaceae	S. canadensis	160
Anonaceae	Rollinia pittier				160
Meliaceae	R. glabra						160		80
Acanthaceae	R. tubiflora										160
Caesalpinaceae	S. papillosa						160
Siparunaceae	S. thecaphora						160
Solanaceae	S. arboreum				160	160		160	160		160				160
Bignoniaceae	T. chrysantha		160												160
Euphorbiaceae	T. euryphyllum		160						160
Clusiaceae	V. baccifera		160			160	160						160
Solanaceae	W. solanacea	160	160	160	160	160			160		160	160	160		160
Araceae	X. undipes						160
Rutaceae	Z. juniperinum	160													160

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz.

CUADRO 3

Concentración mínima inhibitoria anti-Leishmania sp. (CI50, µg/mL) de los extractos frescos (F)

y secos (S) de las partes positivas de plantas de la REBAMB

 

TABLE 3

Minimal inhibitory concentration anti-Leishmania sp. (IC50, µg/mL) of the fresh (F)

and dry (S) extracts of the positive parts of plants from REBAMB

 

Especie	Parte de la planta
	C		FL		FI		FM		HM		HT		R
	F	S	F	S	f	s	F	S	F	S	F	S	F	S
B. frutescens	9.7	2.8	56.9	38.1	7.5	12.5	6.3	6.4		66.7	30.3	10.8	0.6	3.5
C. dioica	44.4												27.5
C. megalantha		80.0
E. austin-smithii	90.6
G. bullata							98.8
G. tonduzii		53.8				66.3								44.4
M. holwayana	45.0	53.1	65.6								49.2		95.6
N. membranacea									44.5		58.6
N. lobata	81.3	100.0			52.8		25.0	46.4	79.4
P. povedae								76.9
P. auritum										60.0*
R. pittieri				43.1
S. arboreum				53.2		72.5	56.3	72.5						25.8
T. euryphyllum		53.8					95				93.8
W. solanacea	15.9		76.9		98.1						34.1	82.5		96.3
Z. juniperinum	23.4													97.5

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz, f:fresco, s:seco.

CUADRO 4

Distribución de los extractos positivos (CI50<100µg/mL) según parte de la planta y tipo de extracto

 

TABLE 4

Distribution of the positive extracts (IC50<100µg/mL) according to part of the plant and extract type

 

Tipo de extracto	Partes de la planta
	C		F		FI		FM		HM		HT		R		TOTAL
	No.	%	No.	%	No.	%	No.	%	No.	%	No.	%	No.	%	No.	%
Fresco solo	4	23.5	2	11.8	2	11.8	2	11.8	2	11.8	3	17.6	2	11.8	17	41.5
Seco solo	3	21.3	2	14.3	2	14.3	1	7.1	1	7.1	0	0	4	28.6	14	34.1
Fresco y seco	3	30.0	1	10.0	1	10.0	3	30.0	0	0.0	2	20.0	1	10.0	10	24.3
TOTAL	10	24.4	5	12.2	5	12.2	6	14.6	3	7.3	5	12.2	7	17.1	41	100.0

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz.

CUADRO 5

Relación entre la toxicidad máxima in vitro (diluciones 1:80, 1:160) y la actividad contra Leishmania sp.

de las partes positivas de plantas de la REBAMB

 

TABLE 5

Relation between the maximum in vitro toxicity (dilutions 1:80, 1:160) and the anti-Leishmania sp. activity

of the positive parts from plants from REBAMB

 

Especie	Actividad Lítica o Aglutinante
	Ligera		Intensa		Ausente
	1:80	1:160	1:80	1:160
B. frutescens	F,Fs	FIs			C,F, FI,FM, HT, R, FMs, HMs, HTs, Rs
C. dioica					C, F, FI, FM, R, Fs, FIs, HMs
C. megalantha	Cs
E. austin-smithii					C
G. bullata					FM
G. tonduzii	Rs			FI	Cs
M. holwayana		HT		R	C, F, Cs,
N. membranacea				HM, HT	Fs
N. lobata					C,F,FI, HM, Cs, FMs
P. povedae					FMs
P. auritum					HMs
R. pittier	Fs
S. arboreum					FM ,HT, Fs, FIs, FMs
T. euryphyllum					FM, HT, Fs
W. solanacea				C, F, HT, HTs	FI, Rs
Z. juniperinum	Cs				Rs

 

C: corteza, F: flor, FI: fruto inmaduro, FM: fruto maduro, HM: hojas maduras, HT: hojas tiernas, R: raíz, s: extracto seco.