Palabras clave
antibodies
Western Blot
immunodetection
tubulin
protein isolation
electrophoresis
proteínas
anticuerpos
Western Blot
inmunodetección
tubulina
aislamiento
electroforesis
Resumen
La técnica del Western Blot fue descrita, por primera vez, a finales de los setenta y desde entonces, es una metodología ampliamente utilizada en estudios de biología celular y molecular relacionados a la identificación de proteínas. Esta metodología permite la inmunodetección de proteínas específicas de interés en muestras y extractos proteicos complejos y, además, arroja información sobre la cantidad relativa de esta(s) proteína(s) en distintas muestras. Hasta la fecha, la aplicación de un protocolo optimizado de
esta técnica en los laboratorios de la región de Occidente de la Universidad de Costa Rica no ha sido posible. El presente trabajo pretende servir como protocolo de referencia, tanto para la obtención y cuantificación de extractos proteicos totales a partir tejidos de maíz, así como para la implementación de la técnica del Western Blot cuantitativo en el Laboratorio de Biotecnología de
la Sede de Occidente de la UCR. Se describe detalladamente desde la obtención y preparación de los extractos proteicos de maíz, hasta la detección de la proteína control α-tubulina y la cuantificación de la señal detectada en el ensayo inmunológico. Bajo estas condiciones experimentales, el Western Blot resultó ser semicuantitativo para cargas proteicas de 5 a 45 μg.
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